细胞侵袭实验服务

【服务内容】

侵袭实验大部分是对肿瘤细胞侵袭能力的检测，将待研究的细胞加入Transwell小室的上室，下室加入高浓度FBS培养液，下室的培养液影响上室的细胞，使细胞透过基质胶和聚碳酸酯膜，记录细胞的穿过膜的个数，实验过程中不同处理组的细胞透过膜的个数不同，其侵袭能力不同，本实验的目的是检测细胞的侵袭能力的强弱。

【项目和周期】

周期：1~2周

基本步骤：

（1）预冷：枪头、EP 管、培养板、Transwell小室4℃预冷半小时。

（2）包被基底膜：Matrigel胶4℃过夜融化成液态后与无血清 DMEM培养基按1：9比例稀释，每孔 40ul 稀释胶均匀涂布于 Transwell小室滤膜的上表面，37℃、5％CO2细胞培养箱内孵育2小时。

（3）水化基底膜：每室加入50ul无血清的DMEM 培养基，于37℃、5％CO2细胞培养箱内孵育1小时，吸弃培养液。

（4）制备单细胞悬液：分别取转染后培养 24 小时的细胞，0.25％胰酶消化并收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃上清液，用无血清 DMEM 培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度为 1×10e6 个／ml。

（5）接种细胞：将单细胞重悬液各取 200ul 加入上室，下室中加入600ul含 30％FBS 的 DMEM 培养液，每组细胞设3个复孔。种板时注意下层培养基和小室中的聚碳酸酯膜间不要有气泡产生，于37℃、5％CO2 细胞培养箱内培养72小时。

（6）固定、染色：取出小室，小心吸去上室的培养液，PBS缓冲液轻洗 3次，用消毒湿棉签轻轻擦净上室未侵袭细胞及 Martrigel胶，95%酒精固定30min，结晶紫染色 10min，自来水冲洗3次以上，晾干。

（7）拍照、计数：20 倍光学显微镜下观察，计数每视野的侵袭细胞数，计算平均值。实验数据重复3次。

【客户提供的材料】

 1.待检测或处理的细胞；如果常见的人和大小鼠细胞系，公司可免费提供。

 2.细胞处理的相关药物和实验方案；

【反馈给客户结果】

 1、提供相应实验数据和图表；

 2、提供具体的实验报告；