小鼠抗体可变区基因扩增试剂盒
[产品信息]
本试剂盒可以用于对杂交瘤、小鼠外周血单个核细胞、小鼠脾细胞及小鼠其他组织中抗体可变区基因的扩增。相关标本前期需经过mRNA提取和用oligo dt 为引物反转录成cDNA。本试剂盒通过对扩增体系中的组分进行了优化，即保证了扩增的特异性，又扩大了对所有抗体基因的兼容性。可用于任意杂交瘤中鼠源抗体基因的扩增，小鼠免疫后全部抗体基因的扩增和小鼠抗体文库的构建。
[试剂组分]
货号 | 名称 | 规格 |
IS088-1 | 小鼠抗体重链扩增体系 | 100ul |
IS088-2 | 小鼠抗体轻链扩增体系 | 100ul |
IS088-3 | Taq DNA聚合酶预混体系 | 500ul |
IS088-4 | 阳性对照 | 5ul |
[适用范围]
小鼠抗体可变区基因扩增
[储存及有效期]
-20℃保存，有效期6个月。
[实验操作]
所有试剂融化后瞬时离心并放置于冰上，按下列组分配制反应体系（以10ul为例）
1、扩增抗体重链
名称 | 体积ul |
小鼠抗体重链扩增体系 | 1 |
Taq DNA聚合酶预混体系 | 5 |
cDNA | a（含2-100ng DNA，约0.2-1ul） |
H2O | 4-a |
备注：如需做阳性对照，将cDNA换成1ul阳性对照 (IS088-4) 即可。
2、扩增抗体轻链
| 名称 | 体积ul |
| 小鼠抗体重链扩增体系 | 1 |
Taq DNA聚合酶预混体系 | 5 |
| cDNA | a（含2-100ng DNA，约0.2-1ul） |
| H2O | 4-a |
备注：如需做阳性对照，将cDNA换成1ul阳性对照 (IS088-4) 即可。
3、按下列条件扩增
Temp | Time | Cycles |
94℃ | 3min | 1 |
94℃ | 30s | 30 |
55℃ | 30s | |
72℃ | 45s | |
72℃ | 5min | 1 |
4℃ | ∞ | 1 |
4、PCR产物经2％琼脂糖电泳后，取350bp左右的DNA条带为模板进行二次PCR大扩回收，经TA克隆后测序即可获得抗体可变区基因。
[注意事项]
1、试剂避免反复冻融，否则会影响扩增效率；
2、建议采用新鲜标本的cDNA为模板；
3、反应体系的配置在冰上完成。
资质许可
