黑色素瘤B16小鼠肝转移及肺转移模型

恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。该肿瘤主要发生肺转移。本实验所采用的黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。

小鼠成瘤实验：

取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。

选用 C57BL/6J 小鼠建立 B16 细胞肿瘤转移模型，每组 10 只。试验组小鼠尾静脉注射浓度为 5×10 ⁶ /L 的 B16 细胞悬液 0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次，下图为肿瘤细胞尾静脉注射和腹腔给药方法：

图1 小鼠尾静脉及腹腔注射给药方法

于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。

实验结果：

各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。第 21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组，结果见下图：

图2 药物对B16细胞肝脏及肺转移影响的动物实验结果大体图

取材：

1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。