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慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型
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产品包装(模拟)
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通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证
慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型
Rat Model for Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD)
- 编号DSI557Ra02
- 物种Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
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- 规格 每例
- 价格 ¥ 1440
- 原型物种人
- 来源吸烟致慢性阻塞性肺病
- 模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，3-4W，雄性，体重为190-230g。
- 实验分组实验分两组：正常对照组和模型组。
- 实验周期4 weeks
- 建模方法1. 第1天、第14天将大鼠用乙醚吸入麻醉后，暴露喉头，以静脉套管针替代气管导管行气管插管，向大鼠气管内注入200 μg/kg（200 μg/ml溶于生理盐水中） LPS（lipopolysaccharide，脂多糖），完毕后将大鼠直立旋转10-20s，使LPS均匀分布于肺部。
2. 第2-13天，15-28天，每天在有机玻璃密闭箱（70×60×60cm3）持续吸入新鲜的香烟雾45min，15支/天，使密闭箱烟雾浓度约为100-120 mg/m3。每天熏烟后立刻用低于环境温度（20℃）5℃冷空气刺激1小时，造模28天结束。 - 应用疾病模型
1. 观察各组大鼠的活动量、毛发、食量、呼吸、体重等。每周给食前1h称重，观察体重的变化。
2. RT-qPCR检测
收集大鼠PBMC和肺组织，提取RNA，利用RT-PCR检测Foxp3、RORγT的表达。
3. Western blot检测
收集大鼠PBMC和肺组织，提取蛋白，采用western-blot检测TAZ水平。
4. 流式细胞检测外周血T淋巴细胞亚群
收集各组大鼠腹主动脉血2ml左右，利用大鼠外周血淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞（PBMC）细胞悬液。
（1）检测Th17时，细胞悬液加入佛波酯（50ng/ml）、离子霉素（1μg/ml）和莫能菌素（2μmol/L），37℃、5%CO2培养箱终培养6h后，反复洗涤3次后100μL PBS重悬，然后加入CD4单克隆抗体10μL，混匀后4℃避光孵育30min，洗涤、固定、破膜，再加入IL-17单克隆抗体10μL，4℃避光孵育20min，反复洗涤后PBS重悬为500μL/管，样品置流式细胞仪检测CD4+IL-17+细胞占CD4+T细胞的比例。
（2）检测Treg细胞时，细胞悬液先加入CD4、CD25单克隆抗体各10μl，混匀后4℃避光孵育30min，洗涤、固定、破膜，再加入FoxP3单克隆抗体10μL，4℃避光孵育20min，反复洗涤后PBS重悬为500μL/管，样品置流式细胞仪检测CD4+CD25+FoxP3+细胞占CD4+T细胞的比例。
HE染色：右肺叶组织固定包埋切片，HE染色，观察肺组织病理变化情况。
ELISA检测：
检测血清和支气管肺泡灌洗液中的IL-17和IL-10水平。
支气管肺泡灌洗液（BALF）抽取方法：大鼠取血后，开胸，分离纵膈，注射器抽取3ml生理盐水从气管插管推入肺中，每次反复灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃ 3000r/min离心15min，取上清。
血清提取方法：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜，然后 1,000×g 离心 20 分钟，取上清即可，将上清置于-20oC 或-80oC 保存，避免反复冻融。
应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显
