免疫组化辅助试剂包（抗兔/小鼠igg）

[产品信息]

通过辣根过氧化物酶（HRP）标记抗兔/小鼠抗体与结合在组织片上的一抗（来源于兔或小鼠）特异性结合形成免疫复合物。位于聚合物上HRP会催化底物H2O2与DAB反应，最终形成棕褐色不溶性色原，特异性的将免疫原在组织和细胞中标定出来，通过显微镜观察确定免疫原的最终位点。

[试剂组分]

[适用范围]

本产品仅用于免疫组化实验，适用于手工和机器大批量操作。本试剂仅对10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋的组织进行了验证，不作其他用途。

[储存及有效期]

2～8℃避光保存，不得冻存；产品有效期为6个月。

[实验操作]
1、完成IHC实验还要的设备和试剂
   a)、移液器、恒温箱、修复仪、免疫组化笔、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶。
   b)、DAB显色液工作液：利用显色剂稀释DAB显色液到工作液浓度，现配现用。
   c)、枸橼酸钠抗原修复液工作液（pH 6.0，0.01M）：利用双蒸水稀释枸橼酸钠抗原修复液（20×）到工作液浓度使用。
2、实验步骤
（1）烘片：铅笔标记用于区分石蜡切片，65℃，1-2小时。
（2）脱蜡至水：烘片结束，石蜡切片依次于二甲苯I 30分钟，二甲苯II 30分钟，100%、100%、95%、80%、70%的乙醇中各10分钟，再放入纯水里10分钟。
（3）抗原修复。
  微波法：取一定量枸橼酸钠抗原修复液工作液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温  塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，微波低火处理3分钟，放置8分钟后低火3分钟，取出微波盒流水自然泠却，从  缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗3分钟×3次。
（4）阻断内源性过氧化物酶。加入适量的内源性过氧化物酶阻断剂工作液，室温孵育10分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
（5）非特异性位点的封闭：甩去残夜，滴加封闭血清工作液覆盖切片，约100-200μL/片，室温孵育20分钟。
（6）根据组织大小，滴加100-200μL或适量的一抗（来自兔/小鼠），37℃孵育60分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
（7）滴加100-200μL或适量的HRP标记抗兔/小鼠IgG聚合物，37℃孵育30分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
（8）显色。加入适量新鲜配制的DAB显色液工作液，室温孵育30秒-10分钟，根据显微镜下着色情况终止反应。
（9）复染。自来水冲洗，苏木素染液孵育0.5-2分钟；滴加1%盐酸酒精分色3秒、PBS浸泡返蓝。
（10）脱水、透明、封片。
（11）显微镜观察，拍照。

[注意事项]
1、在每一次染色过程中，必须有空白对照和阴性对照实验同时进行。
2、如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，应判定该批次样本的检测结果无效。
3、若HRP标记IgG聚合物孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染色过强及背景染色。
4、红细胞和细胞色素 C可能会造成假阳性结果。
5、脱蜡不彻底，容易影响染色效果，建议免疫组化切片脱蜡与常规HE脱蜡分开。
6、为防止可能出现的假阳性、假阴性结果，在实验过程中需设置阳性与阴性对照。
7、实验中滴加试剂时，过多的PBS缓冲液会导致试剂被稀释，将引起染色强度变弱，因此，滴加试剂前应除去多余的缓冲液。
8、在实验操作过程中，请穿戴好手套、眼镜和实验服，以及依照相应的实验流程，做好防护措施。