束缚应激法法建立IBS-D模型：大鼠适应性饲养一周，实验前12h禁食。
大鼠在Day1乙醚吸入麻醉后经肛门插入连接注射器的硅胶管(距肛门8cm)，结肠内灌入40mg/L的乙酸1mL，然后缓慢拔出硅胶管，用手压迫肛门并将大鼠尾巴抬高30S，然后用0.01 mol/L PBS 1mL冲洗结肠。A组大鼠用等体积PBS替代乙酸作相同灌肠处理。然后各组大鼠恢复6天（至Day6）。
大鼠于Day7-Day9给予束缚应激。实验前将大鼠置入限制性鼠笼束缚应激30 min（将大鼠置于限制起肢体但不影响其呼吸的特制透明圆柱形筒内）。对照组置于安静、温暖(18～20℃)、避强光的环境中喂养，自由饮水、摄食。