一、主动行为试验--Morris水迷宫实验

1 原理

实验动物被强迫在水箱内游泳，观察并记录动物寻找到隐藏在水下平台所需的时间、游泳轨迹及其采用的策略，分析和推断动物的学习、记忆和空间定位等方面的能力。

2 仪器与试剂

Morris水迷宫实验系统由圆形水池、图像自动采集和处理系统组成。图像自动采集和处理系统主要由摄像机、计算机、图像监视器组成，动物入水后启动监测装置，记录动物运动轨迹，实验完毕自动分析报告相关参数。 

2.1 Morris水迷宫圆形水池

Morris水迷宫圆形水池为一圆柱形水桶，直径为3000px（小鼠）、高为50-1500px，水池水深为30-1000px，一个圆形平台直径约为225px（小鼠），藏匿于25px的水面之下。水池的内部不得有任何标记，在圆桶的上缘等距离地设东、南、西和北4个标记点，作为动物进水池的入水点，以这4个入水点在水面和水桶底部的投影点作为参照位点，将水面和水桶部分均等的分为4个象限，按实验要求，可任意地将平台设置于某一象限的中间。适当的恒温设备使水温保持在23～25℃。

2.2水迷宫图像自动采集和处理系统　本系统能自动地采集动物的入水位置、游泳的速度、搜索目标的所需时间和运行轨迹等参数，并可对所采集的各种数据进行统计和分析。

3 实验方法

3.1 实验动物  

昆明小鼠86只，体重18－22g。

3.2 实验步骤

连续给予受试物后，实验前一天,小鼠自由游泳2min以熟悉环境，其间引导动物站上平台10s。次日开始训练，训练期间继续给样。

定位航行试验：用于测量实验动物对水迷宫学习和记忆获得的能力。动物每次从1个象限的相同入水点入水，将动物面向池壁放入水中，仪器自动记录动物寻找并爬上平台的路线图、动物从入水到找到水下隐蔽平台并站立其上所需时间(逃避潜伏期)及游泳总路程。每完成4个象限的训练当做1个循环，如果动物在90s内未找到平台，则需将其引至平台，这时潜伏期以90s计，让动物在平台停留10s后，再放回笼中。如此重复完成4个象限的试验，总共训练5天，也就是四个循环，象限选择和各实验组动物训练顺序应随机确定或交叉进行。

空间探索试验：定位航行试验结束5天后，将水下平台撤除，按照定位航行试验的方法重复1个循环（共4个象限）的试验，动物每次从1个象限的入水点入水，记录90s内小鼠在水池4个象限中的游泳距离、路径、时间，据此推算平台所在象限数据占总距离、总时间的百分比及穿越平台的次数，用来反映大鼠对平台所在位置的空间记忆能力，以判断动物记忆储存及提取再现能力。

4 数据处理及结果判定

将每天动物1个循环（共4个象限）的实验数据合并统计，对每1个循环各组的结果进行比较分析。

逃避潜伏期、上台前游泳路程、平台象限活动时间占总时间百分比、平台象限活动路程占总距离百分比、站台穿越次数属计量资料，可用方差分析，t检验用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。90s内站上平台动物数为计数资料，可用χ2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。      

二、 被动行为试验--避暗实验

1 原理

利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室即受到电击，计时自动停止。

2 仪器和试剂

避暗仪：该装置分明暗两室。暗室较大，两室之间有一直径约75px 的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。一般采用40v电压（或0.3-0.4mA电流）底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。暗室与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间，最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器。

3 实验方法

3.1 实验动物 

昆明小鼠86只，体重18－22g。

3.2实验步骤

末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每只小鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5min，并记录5min内电击次数。24h后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min 内的电击次数，并计算5min 内进入暗室（错误反应）的动物百分率。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后进行一次或多次

次记忆消退实验（即记忆再现过程）

4 数据处理及结果判定

潜伏期时间和5min内进入暗室的次数均为计量资料，可用方差分析，t检测用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。90s内站上平台动物数为计数资料，可用χ2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。  。

若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5min内进入暗室的错误次数或5min 内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，可判定为该项指标阳性。以上三项指标中任一阶段（记忆获得和记忆再现）的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。