介绍：

免疫磁珠分选，是基于抗原抗体特异性识别的原理，使用高度特异性单克隆抗体偶联的磁化微粒对目的细胞进行特异性的磁性标记。通过高强度、梯度磁场从而达到细胞磁性分离的目的。

可应用范围：

1. 特定表型的细胞

2. 特定细胞因子分泌细胞

3. 转染细胞

4. 凋亡细胞

磁珠分选特点：

1. 磁珠分选后可获得高纯度（大于90%）、高得率的目的细胞。

2. 磁化微粒和分选柱对细胞无毒性、无损伤，可生物降解。纯化后细胞不影响活性和功能。

3. 除目的细胞外的其它细胞群均可回收利用。

4. 可实现10e5到10e11总细胞数的分选。

5. 与流式细胞仪兼容，不影响细胞光学特效、不影响荧光抗体染色。

分选策略：

1. 阳性分选：将目的细胞磁性标记后，作为阳性组分直接分选。回收率高，适合富集低比例细胞。

2. 去除分选（阴性分选）：将非目的细胞磁性标记后，从总细胞中去除。即未磁性标记的细胞为目的细胞。这种方式目的细胞不与抗体结合，适合于缺乏针对目的细胞的特异性抗体的情况（某些稀有标志）。

3. 去除分选+阳性分选：先去除非目的细胞，再进行阳性分选。适用于非目的细胞也表达阳选标志的情况，可获得高纯度的非常稀有的细胞。

实际案例展示-小鼠脾脏CD4+细胞的分选：

1. 分离小鼠脾脏淋巴细胞：

①小鼠经脱颈处死。浸入75%的乙醇中浸泡1-2min。转入超净工作台中，腹面朝上，剪开小鼠左侧下腹部皮肤，分离小鼠脾脏置入200目筛网上，滴加淋巴细胞分离液4-5ml/个脾脏，用注射器活塞轻轻研磨，使脾脏细胞充分透过筛网过滤至下方容器中。

②将脾脏细胞悬液转移到离心管中，最上层覆盖2ml无血清1640 培养基，800g室温离心30 min。

③吸出淋巴细胞层，加入10ml无血清1640 培养基洗涤，250g 室温离心10min。弃去上清。

2. CD4+ 磁珠分选：

①Fc受体封闭：加入FACs buffer 稀释的anti-CD16/CD32  antibody工作液， 4℃孵育30min。

②200目筛网再次过滤。1000rpm 4℃离心10min。

③磁珠孵育：FACs buffer 稀释磁珠及表面染色抗体，加入CD4+ beads工作液,4℃避光孵育30min。

④1000rpm 4℃离心10min。珠分选柱安放在分选器中，加3ml FACs buffer入加样池内润洗柱子。待分选柱中液体自然流干后，将离心后细胞轻柔加入分选柱加样池中，等待样品完全自然流出。

⑤洗涤分选柱。

⑥将分选柱移出分选器磁场，搁置在15ml离心管上，加5ml 原代细胞完全培养基入加样池内，迅速一次性打出所有液体。

⑦离心洗涤。

3.分选后流式染色鉴定：

分别取分选前总细胞、分选后细胞，CD4-FITC染色，流式检测CD4+细胞数的比例。