哮喘模型

哮喘又名支气管哮喘。支气管哮喘是由多种细胞及细胞组分参与的慢性气道炎症，此种炎症常伴随引起气道反应性增高，导致反复发作的喘息、气促、胸闷和/或咳嗽等症状，多在夜间和/或凌晨发生，此类症状常伴有广泛而多变的气流阻塞，可以自行或通过治疗而逆转。

    6.1 哮喘小鼠模型建立

SPF级Balb/c雌性小鼠，体重约20g。采用OVA致敏诱导建立哮喘模型。

OVA致敏诱导的哮喘模型：分别于第1、8、15 天腹腔注射OVA 混悬液（含OVA 1 g /L，氢氧化铝5 g /L） 0.2 ml，实验第21 天起将小鼠置于雾化激发器内，给予2% OVA 生理盐水雾化激发，1次/d，每次30 min，连续7 天，将小鼠呼吸急促，搔鼻抓痒、呛咳烦躁、点头运动等作为哮喘小鼠模型成功的标准。正常对照组以生理盐水代替OVA腹腔注射和雾化激发，操作同上所述。

    6.2 模型鉴定及后续检测：

        6.2.1 小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF) TH2型细胞因子蛋白水平检测

待造模完成后，抽取BALF后用ELISA方法检测其中TSLP、IL-33和MUC5AC的表达情况。

附支气管肺泡灌洗液抽取方法：小鼠取血后，开胸，分离纵膈，注射器抽取3ml生理盐水从气管插管推入肺中，每次反复灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃ 3000r/min离心15min，取上清。

结果显示：哮喘模型小鼠与对照组小鼠相比，炎性因子及趋化因子水平均有显著性升高。

图. 哮喘模型小鼠与对照小鼠BALF中各类细胞因子的表达水平对比 

        6.2.2 肺组织病理学检测

HE染色检测：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，开胸暴露胸腔：取左侧肺叶固定于 10%甲醛溶液 24h，常规脱水石蜡包埋，切片行 HE 染色，光镜下观察。

结果显示：空白对照组小鼠肺泡结构清晰，肺泡大小均匀，气道黏膜上皮结构完整，纤毛排列整齐；模型对照组小鼠肺组织肺间隔增厚，支气管部分上皮细胞脱落，有淋巴细胞浸润。

图. 哮喘模型小鼠(右)相对于对照组小鼠肺部组织HE染色对比

阿尔辛蓝—过碘酸雪夫氏染色（AB-PAS染色）检测：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，开胸暴露胸腔：取左侧肺叶固定于 10%甲醛溶液 24h，常规脱水石蜡包埋脱蜡至水，切片行 AB-PAS染色，光镜下观察。

结果显示：与对照组相比，模型组小鼠的肺组织支气管上皮杯状细胞增多。

图. 哮喘模型小鼠(右图)相对于对照组小鼠（左图）肺部组织PAS染色对比