尼氏体染色实验报告
一、实验器材及试剂
1、 实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
包埋机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-BM |
病理切片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-2258 |
摊片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-P |
冻台 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-BL |
烤箱 | 上海精宏实验设备有限公司 | PHG-9070A |
载玻片及盖玻片 | 江苏世泰实验器材有限公司 | 10212432C |
正置光学显微镜 | 日本奥林巴斯 | OLYMPUS CK31 |
成像系统 | 明美Mshot | TVO.63XC-MO |
数字全扫仪器 | 3DHISTECH | Pannoramic SCAN |
脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
2、 主要实验试剂
试剂 | 厂家 | 货号 |
无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10009218 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
尼氏体染色液 | 北京索莱宝 | |
PBS | 武汉云克隆科技股份有限公司 | B006 |
二、组织石蜡包埋切片实验步骤
1、取材:新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精1h-85%酒精1h-90%酒精1h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
3、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。 切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
三.尼氏体染色实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ30min-二甲苯Ⅱ30min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ2min-95%酒精1min-80%酒精1min-70%酒精1min-蒸馏水洗。
2、尼氏体染液染10分钟。
3、95%酒精分化(脑组织分化至尼氏体着深蓝色,背景呈浅蓝色或无色)
4、脱水封片:将切片依次放入无水乙醇Ⅰ1min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
5、显微镜镜检,图像采集分析。
染色结果:可见尼氏小体深蓝色颗粒,细胞核呈淡蓝色,背景基本无色。