一、实验器材及试剂

1、 实验器材

2、 主要实验试剂

二、组织石蜡包埋切片实验步骤

1、取材：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。

2、脱钙：将福尔马林固定好的骨组织，置于20倍体积的10%EDTA脱钙液（EDTA(乙二胺四乙酸二钠）50g，PBS缓冲液  500ml，溶解后用NAOH调PH值到 7.2-7.4）中，放入37度水浴中，3天左右应该更换脱钙液一次，待骨组织可以轻松用针刺入，表面脱钙完全。可将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

3、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精1h-85%酒精1h-90%酒精1h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。

4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。 切片漂浮于摊片机43℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

三、 甲苯胺蓝染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ30min-二甲苯Ⅱ30min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ2min-95%酒精1min-80%酒精1min-70%酒精1min-蒸馏水洗。

2、甲苯胺蓝染液染10分钟。

3、95%酒精分化（骨组织软骨呈紫蓝色，背景呈浅蓝色或无色）

4、脱水封片：将切片依次放入无水乙醇Ⅰ1min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

5、显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：可见骨组织软骨呈紫蓝色，细胞核呈淡蓝色，背景浅蓝色或基本无色。