一、实验器材及试剂

1、 实验器材

2、 主要实验试剂

二、组织石蜡包埋切片实验步骤

1、取材：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

2、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精1h-85%酒精1h-90%酒精1h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。

3、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。 切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。 

三、番红固绿染色实验步骤

1）石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ30min-二甲苯Ⅱ30min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ2min-95%酒精1min-80%酒精1min-70%酒精1min-蒸馏水洗。

2）入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min，水洗；

3）酸性分化液分化15s，蒸馏水洗10min.

4）在固绿染色液中浸染5min.

5）快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿，晾干;

6）入番红染色液内浸染5-10s.

7）按95%乙醇2-3s，无水乙醇2-3s，无水乙醇1min脱水；

8）两缸干净的二甲苯分别透明20min，中性树胶封片；

9）显微镜镜检，图像采集分析。

四、染色结果：软骨呈鲜红色，成骨呈绿色。有些结缔组织也呈红色。