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HE染色实验报告-石蜡切片

一、实验器材及试剂

1、 实验器材

名称

厂家

型号

包埋机

浙江省金华市科迪仪器设备有限公司

KD-BM

病理切片机

浙江省金华市科迪仪器设备有限公司

KD-2258

摊片机

浙江省金华市科迪仪器设备有限公司

KD-P

冻台

浙江省金华市科迪仪器设备有限公司

KD-BL

烤箱

上海精宏实验设备有限公司

PHG-9070A

载玻片及盖玻片

江苏世泰实验器材有限公司

10212432C

正置光学显微镜

日本奥林巴斯

OLYMPUS CK31

成像系统

明美Mshot

TVO.63XC-MO

数字全扫仪器

3DHISTECH

Pannoramic SCAN


2、 主要实验试剂

试剂

厂家

货号

无水乙醇

国药集团化学试剂有限公司


二甲苯

国药集团化学试剂有限公司


HE染色液

自制


PBS

自制



二、组织石蜡包埋切片实验步骤

1、取材新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。

2、脱水将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精1h-85%酒精1h-90%酒精1h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-I 1h-II 1h-III 1h

3、包埋将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4、切片将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm 切片漂浮于摊片机40 温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起并放进60 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用 


三、 HE染色实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水依次将切片放入二甲苯30min-二甲苯30min-无水乙醇10min-无水乙醇10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、苏木素染细胞核切片入Harris苏木素染5-10min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗10分钟PBS返蓝5分钟,流水冲洗。

3、伊红染细胞质切片入伊红染液中染色1-3min

4、脱水封片将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇5min -无水乙醇5min -二甲苯5min -二甲苯5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

5显微镜镜检,图像采集分析。


染色结果细胞核蓝色,细胞质红色。